BXPC-3细胞贴壁太牢消化传代要点。BXPC-3这个细胞株有些老师培养经常状态一直很差，漂浮，空泡，这种情况如何解决呢？

把换液频率降下来，一般可以3天换液，这个细胞生长就是会有少量空泡现象，换液频率降下来，让他稳定生长，空泡细胞会慢慢凋亡，活细胞数量足够就可以了。

有些老师还会传代第二天会漂浮非常多的细胞，这个一般是没有消化好，BxPC-3这个细胞贴壁比较牢，所以如果消化时间过长或胰酶浓度过高，会过度破坏细胞膜表面的贴壁蛋白，导致细胞虽然活着的，但丧失了贴壁能力，传代后大量漂浮。建议就是使用0.25%胰酶-EDTA，并在37℃环境下消化。消化时在显微镜下密切观察，当细胞间隙变大、细胞变圆、但尚未完全漂起时，立即终止。不要为了求快而用力拍打培养瓶，特别提醒这会导致细胞结团。终止消化后，轻轻吹散细胞，避免产生大量气泡。

还有传代比例不宜过大，不建议超过1:4，如果细胞已漂浮，可以尝试离心收集所有漂浮细胞，用新鲜培养基重悬后，重新种回原瓶或新瓶。有时它们只是需要更多时间来贴壁。消化时间可以拉长一点，5-8min，这个细胞特性就是这样，贴的很牢，很难消化，时间拉长，和二次消化都是可以的，因为时间太长对细胞有损伤，不过看图细胞数量是可以，所以消化时间拉长是没问题了，消化的时候，如果2分钟细胞只是变圆但没掉，说明还需要时间。继续放回37度培养箱，但不要干等5-8分钟。可以在3-4分钟的时候拿出来看一下。在显微镜下观察，如果你轻轻晃动培养瓶/皿，能看到贴壁的细胞层出现像沙漠中风沙流动一样的纹理，或者细胞层有细小的裂缝，这就说明细胞间连接已经断了，到了可以轻拍脱落的临界点。拿出培养瓶，在手掌侧或桌面轻轻拍打瓶壁（不要用枪吹），如果消化到位，你会看到细胞成片成片地像“雪花”一样滑落下来， 一旦看见细胞大片脱落，马上加入含血清的培养基终止消化。

 BXPC-3细胞贴壁太牢消化传代要点。