产品信息
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产品名称：婴儿利什曼虫探针法荧光定量PCR试剂盒
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英文名称：Leishmania infantum Probe qPCR Kit
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货号：15-18620
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版本：使用手册 V1.1
产品特点
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即开即用：用户只需提供DNA模板即可进行检测。
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高灵敏度与快速反应：采用探针法荧光定量PCR技术，灵敏度高，反应迅速。
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内置阳性对照：便于区分假阴性样品，确保检测结果准确性。
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适用范围：适用于科研用途，检测婴儿利什曼虫（Leishmania infantum），该病原体可引起动物源性内脏利什曼病（黑热病）。
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兼容性：与市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。
规格及成分
| 成分 | 编号 | 规格 |
|---|---|---|
| 2 × Probe qPCR Mix | 190504a | 600 μL |
| DEPC-H2O | 180701 | 1 mL |
| 婴儿利什曼虫qPCR引物-探针混合液 | 15-18620yp | 90 μL |
| 婴儿利什曼虫qPCR阳性对照 | 18620pc | 50 μL（1×10^8拷贝/μL） |
| 使用手册 | 15-18620sc | 1份 |
运输与保存
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运输条件：低温运输。
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保存条件：-20℃保存，保存期限为一年。
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注意事项：阳性对照需单独放置，避免污染其他试剂。
自备试剂
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样品DNA。
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超纯水。
使用方法
一、DNA提取（样本制备区）
使用自选方法提取纯化样品DNA，本试剂盒兼容大多数核酸提取试剂盒。
二、稀释标准曲线样品（样本制备区）
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标记6个离心管，编号为7、6、5、4、3、2。
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每管加入45 μL DEPC-H2O（建议使用带芯枪头）。
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在7号管中加入5 μL阳性对照（1×10^8拷贝/μL），震荡1分钟，得到1×10^7拷贝/μL的标准曲线样品。
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依次稀释至6号管（1×10^6拷贝/μL）、5号管（1×10^5拷贝/μL），直至完成6个稀释梯度。
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若无需制作标准曲线，将阳性对照稀释至1×10^5拷贝/μL即可。
三、试剂配制（试剂准备区）
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准备N+2个qPCR管（N个待检样品+1个阴性对照+6个阳性对照）。
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每管加入以下成分：
| 成分/每管 | 待检样品管 | 阴性对照 | 阳性对照 |
|---|---|---|---|
| 2 × Probe qPCR Mix | 10 μL | 10 μL | 10 μL |
| 引物-探针混合液 | 1.5 μL | 1.5 μL | 1.5 μL |
| DEPC-H2O | 6.5 μL | 6.5 μL | 6.5 μL |
四、添加模板（模板添加区）
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每管加入2 μL模板，顺序为：阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品、阳性对照。
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离心30秒后立即进行扩增。
五、扩增反应（扩增及产物分析区）
使用以下扩增程序：
| 过程 | 温度 | 时间 |
|---|---|---|
| 预变性 | 95℃ | 3 min |
| qPCR反应（40循环） | 95℃ | 15 sec |
| 58℃ | 20 sec | |
| 72℃ | 20 sec（采集FAM通道荧光信号） |
探针标记：
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荧光基团：FAM
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猝灭基团：MGB
六、结果分析
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标准曲线法：以阳性对照浓度的log值为横轴，Ct值为纵轴绘制标准曲线，推算样品浓度。
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直接判定法：
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阳性对照：Ct值<30，有明显指数增长。
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阴性对照：Ct值>38或无Ct值。
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样本判定：
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Ct值<35：阳性（检测到婴儿利什曼虫）。
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Ct值>38：阴性（未检测到）。
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Ct值35-38：需复检，重复结果仍在此范围且有指数增长则判定为阳性。
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关联产品
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婴儿利什曼虫染料法荧光定量PCR试剂盒
注意事项
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操作时需分区进行，避免交叉污染。
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阳性对照需谨慎处理，防止污染其他试剂或样品。
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本试剂盒仅限科研使用。
厂家信息：上海雅吉生物科技有限公司
