1. 产品概述
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基因名称：SMPX（Small Muscle Protein, X-linked）
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技术方法：采用 CRISPR-Cas9 基因编辑技术，确保高效、精准的基因敲除。
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细胞类型：可根据需求选择 HEK293、HCT116、HeLa 等常见细胞系，或定制原代细胞敲除112。
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验证方式：
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基因组水平：PCR + Sanger测序确认基因敲除（Indel或大片段缺失）。
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蛋白水平：Western Blot（WB）检测SMPX蛋白表达缺失（需使用特异性抗体）。
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脱靶分析（可选）：NGS测序检测潜在脱靶位点113。
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2. 产品优势
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高敲除效率：采用 双gRNA策略，敲除效率可达 90%以上1。
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严格质控：细胞株经过 支原体检测、单克隆验证、稳定性测试（>20代）115。
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配套服务：提供 野生型对照细胞 和 技术支持（如WB检测建议）1。
3. 适用研究领域
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肌肉疾病研究（SMPX与X-linked肌病相关）。
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听觉功能研究（SMPX在内耳毛细胞中表达）。
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基因功能与信号通路研究。
二、SMPX基因敲除细胞株操作步骤
1. 细胞复苏与培养
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快速解冻：从液氮中取出冻存管，37℃水浴融化，加入预热的完全培养基（含10% FBS）。
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离心去DMSO：1000 rpm离心5分钟，弃上清，重悬于新鲜培养基。
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培养扩增：接种于T25培养瓶，37℃、5% CO₂培养，观察细胞贴壁情况（贴壁细胞）或悬浮生长（悬浮细胞）。
2. 基因敲除验证
(1) 基因组DNA提取
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使用 基因组提取试剂盒 提取细胞DNA。
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PCR扩增SMPX靶区域（设计引物覆盖gRNA切割位点）。
(2) Sanger测序
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送测PCR产物，分析测序峰图，确认 插入/缺失（Indel） 或 大片段缺失（若采用双gRNA策略）13。
(3) Western Blot验证
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提取细胞总蛋白，使用 SMPX特异性抗体（如Abcam #xxxxx）检测蛋白表达是否消失16。
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注意：若仍有残留信号，可能是 可变剪接导致截短蛋白，需重新设计gRNA靶向关键外显子16。
3. 细胞冻存与保种
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收集对数期细胞，计数后调整至 5×10⁶ cells/mL。
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使用 冻存液（90% FBS + 10% DMSO） 分装至冻存管。
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程序降温：4℃ 30min → -20℃ 2h → -80℃过夜 → 液氮长期保存15。
三、常见问题与解决方案
| 问题 | 可能原因 | 解决方案 |
|---|---|---|
| WB检测到残留蛋白 | 可变剪接 / 移码突变未完全破坏ORF | 改用 大片段敲除策略 或靶向多个外显子16 |
| 敲除效率低 | gRNA活性不足 / 细胞转染效率低 | 更换高活性gRNA / 优化电转条件13 |
| 细胞生长异常 | SMPX为必需基因 / 脱靶效应 | 使用 可诱导型Cas9 或进行 救援实验（Rescue）12 |
四、商业化服务推荐
