一、细胞培养条件
二、细胞收货后处理
A、复苏细胞处理方法：培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是运输细胞的最好办
法。收到细胞用 75%酒精喷洒整个细胞瓶，严格无菌后将细胞瓶放置培养箱中静置 2-4 小时
以稳定细胞状态。静置后显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（最好
40x,100x,200x 各一张），前三天照片是重要售后依据，不提供照片默认收到状态良好。
B、冻存细胞处理方法：收到细胞后，观察泡沫箱中干冰是否有剩余，冻存管是否完好无损
是否有解冻情况，若发现干冰完全汽化或冻存管有解冻破损现象，请及时拍照并与我们联系。
如果细胞签收三天内未与我们联系，则默认为收货良好。复苏第一管如有活性问题，请及时
联系我们，技术人员与您沟通指导后再复苏第二管，未与我方联系擅自复苏第二管出现问题
不予售后。
三、细胞培养步骤
a、细胞传代：如细胞密度超 80%，即可进行传代培养，步骤如下：
1) 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次；
2) 加 1-2mL 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置培养箱中消化 1-2min ，
然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下
培养瓶后，加 5ml 以上含 10%血清的完全培养基终止消化；
3) 轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出至离心管中，1000 rpm 离心 5-8min，弃去上清液，补加
1-2mL 完全培养基后吹匀；
4) 按 5-6mL 每瓶补加完全培养基，将细胞悬液按 1:2 的比例分到新的含 5-6 mL 完全培养基
的 6cm 培养皿中或者 T25 培养瓶中。
（即 1 个 T25 瓶传代接种至 2 个 T25 瓶或者 2 个 6cm 的培养皿）
b、细胞冻存：细胞收集参照传代步骤，按冻存数量（推荐每支冻存管 5×10 6左右细胞数量
冻存），加入 1ml 的我司无血清冻存液（货号：C7001），轻轻混匀后，放-80℃冰箱，24
小时后转入液氮罐中。
培养条件
空气，95%；CO2，5% ；37℃
生长特性
贴壁生长
冻存条件
无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系
专用培养基
传代方法
第一次建议 1:2 传代 传代情况
2 天换液
备注
天气寒冷可能会导致细胞冷缩脱落，如脱落较多，参考下列（四、
注意事项），如脱落不多正常操作即可。瓶中完培可收集使用。NO.YS1767C
C、细胞复苏：从液氮灌或-80℃冰箱中找到需要复苏的细胞，水浴锅提前打开预热 37℃。
1) 将冻存细胞在 37℃水浴中迅速摇晃解冻；
2) 将冻存管中的细胞移至含 5ml 完全培养基的离心管中，1000 rpm 离心 5min；
3) 弃去上清液，补加 5mL 完全培养基后吹匀，接种于 T25 培养瓶中或 6cm 皿中，培养过夜，
第二天换液并检查细胞密度。
四、注意事项：有些细胞贴壁不牢，在运输过程中细胞容易脱落，这是正常现象。如脱落较
多可将培养瓶所有培养液收集至离心管，1000rpm 离心 5-8min，收集上清作过渡培养，沉淀
加入胰酶 1-2ml，轻轻吹打，重悬，消化 1-2 分钟后，加 5ml 完全培养基终止反应。再离心，
弃上清，加 1-2ml 完全培养基重悬。然后按 1:2 比例进行分瓶传代，补充新的完全培养基至
5-6ml/瓶，最后放入细胞培养箱中培养。
五、售后条款：
1）细胞出现问题，可重发的情况有哪些？判定标准是什么？
1. 细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，重发；
2. 细胞污染问题，请在收到产品 48 小时内，给我们提出真实的实验结果，核实后重发；
3. 常温发货的细胞静置 24 小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后 24 小时后，绝大多数细胞
未存活，（需提供真实清晰的细胞状态照片），重发；
4. 干冰冻存发货的细胞复苏后 24 小时后或常温发货的细胞静置 4 小时候并且未开封，出现
污染，重发；
5. 细胞活性问题，请在收到产品 7 天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定
细胞活力，核实后予重发；
6. 细胞收到当天以及第 2,3 天请拍照，3 天未告知的，视为产品合格。4-7 天内出现问题有
提供收到细胞前 3 天照片和细胞出现问题时照片以及细胞相关操作的详细步骤的，并跟技术
人员沟通的，由技术人员判定为我方责任的，重发。技术人员判定为双方承担责任的由双方
进行协商处理或者按合同价的 50%收费重发。
2）细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？
1. 客户造成细胞污染，不重发；
2. 客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；
3. 非本库推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；
4. 细胞状态不好，未提供细胞培养前 3 天照片的，不重发；
5. 细胞培养时经其它处理的，不重发；
6. 细胞收到 2 天内，未告知，不重发；
7. 视具体情况而定。
发表中文论文标注：（细胞名称货号）由上海雅吉生物科技有限公司提供；
发表英文论文标注：（细胞名称货号）Provided by Shanghai Yaji Biotechnology Co., Ltd
