培养说明书

一、细胞培养条件

培养条件	空气，95%；CO2，5% ；37℃
生长特性	贴壁生长	冻存条件	无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系	1640+10%FBS+1%P/S
传代方法	第一次建议1:2传代	传代情况	2天换液
备注	本库的细胞仅用于科研工作，未经许可不得用于其他目的，使用者不得将本库细胞转让给第三者。

二、细胞收货后处理

A、复苏细胞处理方法：培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是运输细胞的最好办法。收到细胞用75%酒精喷洒整个细胞瓶，严格无菌后将细胞瓶放置培养箱中静置2-4小时以稳定细胞状态。静置后显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（最好40x,100x,200x各一张），前三天照片是重要售后依据，不提供照片默认收到状态良好。

B、冻存细胞处理方法：收到细胞后，观察泡沫箱中干冰是否有剩余，冻存管是否完好无损是否有解冻情况，若发现干冰完全汽化或冻存管有解冻破损现象，请及时拍照并与我们联系。如果细胞签收三天内未与我们联系，则默认为收货良好。复苏第一管如有活性问题，请及时联系我们，技术人员与您沟通指导后再复苏第 二管，未与我方联系擅自复苏第二管出现问题不予售后。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代：如细胞密度超80%，即可进行传代培养，步骤如下：

1) 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次；

2) 加1-2mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置培养箱中消化 1-2min ，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后，加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化；

3) 轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出至离心管中，1000 rpm离心5-8min，弃去上清液，补加1-2mL完全培养基后吹匀；

4) 按5-6mL每瓶补加完全培养基，将细胞悬液按1:2的比例分到新的含5-6 mL完全培养基的6cm培养皿中或者T25培养瓶中。

（即1个T25瓶传代接种至2个T25瓶或者2个6cm的培养皿）

b、细胞冻存：细胞收集参照传代步骤，按冻存数量（推荐每支冻存管5×10⁶左右细胞数量冻存），加入1ml的我司无血清冻存液（货号：C7001），轻轻混匀后，放-80℃冰箱，24小时后转入液氮罐中。

C、细胞复苏：从液氮灌或-80℃冰箱中找到需要复苏的细胞，水浴锅提前打开预热37℃。

1) 将冻存细胞在37℃水浴中迅速摇晃解冻；

2) 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的离心管中，1000 rpm离心5min；

3) 弃去上清液，补加5mL完全培养基后吹匀，接种于T25培养瓶中或6cm皿中，培养过夜，第二天换液并检查细胞密度。

四、注意事项：有些细胞贴壁不牢，在运输过程中细胞容易脱落，这是正常现象。如脱落较多可将培养瓶所有培养液收集至离心管，1000rpm离心5-8min，收集上清作过渡培养，沉淀加入胰酶1-2ml，轻轻吹打，重悬，消化1-2分钟后，加5ml完全培养基终止反应。再离心，弃上清，加1-2ml完全培养基重悬。然后按1:2比例进行分瓶传代，补充新的完全培养基至5-6ml/瓶，最后放入细胞培养箱中培养。

五、售后条款：

1）细胞出现问题，可重发的情况有哪些？判定标准是什么？

1. 细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，重发；

2. 细胞污染问题，请在收到产品48小时内，给我们提出真实的实验结果，核实后重发；

3. 常温发货的细胞静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后，绝大多数细胞未存活，（需提供真实清晰的细胞状态照片），重发；

4. 干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后或常温发货的细胞静置4小时候并且未开封，出现污染，重发；

5. 细胞活性问题，请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后予重发；

6. 细胞收到当天以及第2,3天请拍照，3天未告知的，视为产品合格。4-7天内出现问题有提供收到细胞前3天照片和细胞出现问题时照片以及细胞相关操作的详细步骤的，并跟技术人员沟通的，由技术人员判定为我方责任的，重发。技术人员判定为双方承担责任的由双方进行协商处理或者按合同价的50%收费重发。

2）细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？

1. 客户造成细胞污染，不重发；

2. 客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；

3. 非本库推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；

4. 细胞状态不好，未提供细胞培养前3天照片的，不重发；

5. 细胞培养时经其它处理的，不重发；

6. 细胞收到2天内，未告知，不重发；

7. 视具体情况而定。 

 

发表中文论文标注：（细胞名称货号）由上海雅吉生物科技有限公司提供；

发表英文论文标注：（细胞名称货号）Provided by Shanghai Yaji Biotechnology Co., Ltd

HL-7702人肝正常细胞作为一株重要的肝细胞模型，在基础研究和应用研究中具有广泛的意义和前景。以下是其研究价值和发展方向的总结：

1. 研究意义

（1）肝脏生理与病理机制研究

• HL-7702细胞来源于人正常肝组织，具有典型的肝细胞形态和功能特征，如表达白蛋白（ALB）和肝细胞核因子4α（HNF4A），可用于研究肝细胞代谢、解毒、合成等功能16。

• 该细胞株可用于模拟肝损伤、纤维化、脂肪肝等疾病模型，如甘氨脱氧胆酸盐（GCDC）诱导的肝细胞凋亡研究，揭示胆汁淤积性肝病的分子机制14。

（2）药物毒理学与药效评估

• HL-7702细胞广泛应用于药物肝毒性测试，如评估药物对肝细胞的损伤机制（如ROS生成、线粒体功能障碍等）14。

• 可用于筛选保肝药物，如研究PI3K/AKT/mTOR信号通路在保护肝细胞免受胆汁酸毒性中的作用14。

（3）肿瘤微环境与肝癌研究

• 在3D仿生肿瘤模型中，HL-7702细胞可与肝癌细胞（如MHCC-97H）和肝星状细胞（LX2）共培养，模拟肝癌微环境，研究多细胞相互作用对肿瘤进展的影响10。

• 该模型可揭示肝细胞在肿瘤微环境中的功能变化，如ALB表达下调、HSC激活及胶原沉积等10。

2. 研究前景

（1）3D细胞培养与类器官技术

• 传统的2D培养无法完全模拟体内环境，而3D水凝胶共培养系统（如胶原/海藻酸钠/透明质酸复合凝胶）可更好地再现肝组织的空间结构，未来可用于更精准的药物筛选和疾病建模10。

• 结合类器官技术，HL-7702细胞可能用于构建更复杂的肝脏仿生系统，如肝小叶模型或肝-免疫共培养体系。

（2）基因编辑与精准医学

• 通过CRISPR-Cas9等基因编辑技术，可构建特定基因突变的HL-7702细胞系，用于研究遗传性肝病（如Wilson病、α1-抗胰蛋白酶缺乏症）的发病机制10。

• 结合患者来源的肝细胞，可开发个体化药物测试平台。

（3）生物人工肝与再生医学

• HL-7702细胞具有潜在的生物人工肝应用价值，可作为体外肝支持系统的细胞来源，未来或可结合生物材料优化其功能16。

• 在肝再生研究中，该细胞可用于探索肝细胞增殖、去分化及转分化的分子机制。

3. 挑战与改进方向

• HeLa污染问题：部分HL-7702细胞株存在STR检测与HeLa细胞相似的问题，需严格鉴定以确保实验可靠性1。

• 培养条件优化：不同实验室使用的培养基（如DMEM+10% FBS或RPMI-1640+20% FBS）可能影响细胞表型，需标准化培养方案1613。

• 功能稳定性：长期传代可能导致ALB表达缺失，需控制代次并定期检测功能标记物1。

结论

 

HL-7702细胞作为重要的肝细胞模型，在肝脏疾病机制研究、药物开发及生物医学工程中具有广泛的应用价值。未来，结合3D培养、基因编辑和类器官技术，其研究前景将更加广阔，为肝病治疗和肝脏再生医学提供新的突破点。