一、细胞背景
1. 细胞名称: NCI-H460/cis
2. 细胞来源: NCI-H460/cis细胞是由人大细胞肺癌细胞系NCI-H460通过逐步暴露于顺铂（Cisplatin）诱导产生的顺铂耐药株。
3. 细胞特性:
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NCI-H460/cis细胞具有对顺铂的耐药性，常用于研究肺癌耐药机制、药物筛选和肿瘤治疗策略。
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该细胞系保留了NCI-H460的肿瘤特性，包括快速增殖和侵袭性生长。
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NCI-H460/cis细胞在体外培养中呈贴壁生长，形态为上皮样。
4. 应用领域:
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肺癌耐药机制研究
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抗肿瘤药物筛选
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肿瘤治疗策略开发
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肿瘤生物学研究
二、NCI-H460/cis细胞培养方法
1. 培养基准备
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基础培养基: RPMI-1640
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补充物:
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10% 胎牛血清（FBS）
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1% 青霉素-链霉素（100 U/mL 青霉素和 100 µg/mL 链霉素）
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1 µM 顺铂（用于维持耐药性，可根据实验需求调整浓度）
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配制方法:
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将 RPMI-1640 培养基与 FBS 和青霉素-链霉素混合，充分混匀。
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加入顺铂，使用 0.22 µm 滤膜过滤除菌，4℃ 保存。
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2. 细胞复苏
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准备工作:
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预热培养基至 37℃。
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准备 15 mL 离心管和培养瓶。
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复苏步骤:
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从液氮罐中取出冻存的 NCI-H460/cis 细胞，迅速放入 37℃ 水浴中，轻轻摇动直至完全解冻。
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将细胞悬液转移至含有 5 mL 预热的培养基的 15 mL 离心管中。
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1000 rpm 离心 5 分钟，弃上清。
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用新鲜培养基重悬细胞，转移至培养瓶中，置于 37℃、5% CO₂ 培养箱中培养。
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3. 细胞传代
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观察细胞状态:
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当细胞密度达到 80%-90% 时，即可进行传代。
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传代步骤:
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弃去旧培养基，用 PBS 轻柔洗涤细胞 2 次，去除残留血清。
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加入 1-2 mL 0.25% 胰酶（含 EDTA），37℃ 孵育 1-2 分钟，直至细胞脱落。
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加入等体积的完全培养基终止消化，轻轻吹打细胞使其分散。
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将细胞悬液转移至 15 mL 离心管中，1000 rpm 离心 5 分钟，弃上清。
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用新鲜培养基重悬细胞，按 1:3 至 1:5 的比例分装至新的培养瓶中。
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补充新鲜培养基至适当体积，置于 37℃、5% CO₂ 培养箱中继续培养。
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4. 细胞冻存
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冻存液配制:
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90% FBS + 10% DMSO，充分混匀。
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冻存步骤:
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收集对数生长期的细胞，1000 rpm 离心 5 分钟，弃上清。
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用冻存液重悬细胞，调整细胞密度至 1×10⁶ - 1×10⁷ cells/mL。
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将细胞悬液分装至冻存管中，每管 1 mL。
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采用程序降温法冻存细胞：4℃ 30 分钟，-20℃ 2 小时，-80℃ 过夜，最后转移至液氮中长期保存。
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三、注意事项
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无菌操作:
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所有操作需在无菌条件下进行，避免细胞污染。
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使用无菌培养瓶、离心管和移液器。
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细胞密度控制:
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保持适当的细胞密度（通常为 1×10⁵ - 1×10⁶ cells/mL），避免过度生长或密度过低。
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细胞密度过高可能导致细胞凋亡或分化。
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培养基更换:
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每 2-3 天更换一次新鲜培养基，保持细胞良好的生长状态。
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更换培养基时，轻柔操作，避免损伤细胞。
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细胞状态观察:
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定期在显微镜下观察细胞形态和生长状态，确保细胞健康。
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正常 NCI-H460/cis 细胞呈贴壁生长，形态为上皮样，若出现细胞脱落或形态异常，需及时处理。
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冻存与复苏:
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冻存时使用高质量的冻存液，并确保细胞处于对数生长期。
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复苏时快速解冻，避免细胞损伤。
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培养环境:
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保持恒定的培养条件：37℃、5% CO₂ 和 95% 湿度。
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定期检查 CO₂ 培养箱的浓度和温度，确保稳定性。
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细胞污染处理:
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若发现细胞污染（如细菌、真菌或支原体），立即停止培养并彻底消毒培养环境。
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污染的细胞应丢弃，避免交叉污染。
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耐药性维持:
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在培养基中加入 1 µM 顺铂以维持细胞的耐药性，避免长期培养导致耐药性丧失。
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定期检测细胞的耐药性，确保实验结果的可靠性。
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四、总结
NCI-H460/cis人大细胞肺癌顺铂耐药株是一种重要的肿瘤研究模型，广泛应用于肺癌耐药机制、药物筛选和肿瘤治疗策略的研究。通过规范的培养方法和严格的操作流程，可以确保细胞的健康生长和实验结果的可靠性。在实际操作中，需特别注意无菌操作、细胞密度控制和培养环境的稳定性，以确保实验的顺利进行。
