FRTL-5大鼠甲状腺细胞怎么培养？_产品导购_上海雅吉生物科技有限公司

1. 细胞名称: FRTL-5大鼠甲状腺细胞
2. 细胞来源: FRTL-5细胞来源于Fischer大鼠的甲状腺组织，是一种常用的甲状腺细胞模型。
3. 细胞特性:

4. 应用领域:

基础培养基: Coon's Modified Ham's F-12 培养基
补充物:
- 5% 胎牛血清（FBS）
- 1% 青霉素-链霉素（100 U/mL 青霉素和 100 µg/mL 链霉素）
- 激素混合物（以下为每 500 mL 培养基的添加量）：
  - 10 µg/mL 胰岛素
  - 10 nM 氢化可的松
  - 5 µg/mL 转铁蛋白
  - 10 ng/mL 甘氨酸-组氨酸-赖氨酸三肽（Gly-His-Lys）
  - 10 mU/mL 促甲状腺激素（TSH）
  - 10 ng/mL 生长抑素（Somatostatin）
配制方法:
- 将 Coon's Modified Ham's F-12 培养基与 FBS、青霉素-链霉素和激素混合物混合，充分混匀。
- 使用 0.22 µm 滤膜过滤除菌，4℃ 保存。

准备工作:
- 预热培养基至 37℃。
- 准备 15 mL 离心管和培养瓶。
复苏步骤:
- 从液氮罐中取出冻存的 FRTL-5 细胞，迅速放入 37℃ 水浴中，轻轻摇动直至完全解冻。
- 将细胞悬液转移至含有 5 mL 预热的培养基的 15 mL 离心管中。
- 1000 rpm 离心 5 分钟，弃上清。
- 用新鲜培养基重悬细胞，转移至培养瓶中，置于 37℃、5% CO₂ 培养箱中培养。

观察细胞状态:
- 当细胞密度达到 80%-90% 时，即可进行传代。
传代步骤:
- 弃去旧培养基，用 PBS 轻柔洗涤细胞 2 次，去除残留血清。
- 加入 1-2 mL 0.25% 胰酶（含 EDTA），37℃ 孵育 1-2 分钟，直至细胞脱落。
- 加入等体积的完全培养基终止消化，轻轻吹打细胞使其分散。
- 将细胞悬液转移至 15 mL 离心管中，1000 rpm 离心 5 分钟，弃上清。
- 用新鲜培养基重悬细胞，按 1:3 至 1:5 的比例分装至新的培养瓶中。
- 补充新鲜培养基至适当体积，置于 37℃、5% CO₂ 培养箱中继续培养。

冻存液配制:
- 90% FBS + 10% DMSO，充分混匀。
冻存步骤:
- 收集对数生长期的细胞，1000 rpm 离心 5 分钟，弃上清。
- 用冻存液重悬细胞，调整细胞密度至 1×10⁶ - 1×10⁷ cells/mL。
- 将细胞悬液分装至冻存管中，每管 1 mL。
- 采用程序降温法冻存细胞：4℃ 30 分钟，-20℃ 2 小时，-80℃ 过夜，最后转移至液氮中长期保存。

无菌操作:
- 所有操作需在无菌条件下进行，避免细胞污染。
- 使用无菌培养瓶、离心管和移液器。
细胞密度控制:
- 保持适当的细胞密度（通常为 1×10⁵ - 1×10⁶ cells/mL），避免过度生长或密度过低。
- 细胞密度过高可能导致细胞凋亡或分化。
培养基更换:
- 每 2-3 天更换一次新鲜培养基，保持细胞良好的生长状态。
- 更换培养基时，轻柔操作，避免损伤细胞。
细胞状态观察:
- 定期在显微镜下观察细胞形态和生长状态，确保细胞健康。
- 正常 FRTL-5 细胞呈贴壁生长，形态为上皮样，若出现细胞脱落或形态异常，需及时处理。
冻存与复苏:
- 冻存时使用高质量的冻存液，并确保细胞处于对数生长期。
- 复苏时快速解冻，避免细胞损伤。
培养环境:
- 保持恒定的培养条件：37℃、5% CO₂ 和 95% 湿度。
- 定期检查 CO₂ 培养箱的浓度和温度，确保稳定性。
细胞污染处理:
- 若发现细胞污染（如细菌、真菌或支原体），立即停止培养并彻底消毒培养环境。
- 污染的细胞应丢弃，避免交叉污染。